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天博最新下载地址:蛋白纯化常见问题(一)

那么下面天博最新下载地址为大家简单介绍一下蛋白纯化常见问题(一)。
Q:如何去除样品中的 DNA/RNA 等核酸杂质污染?
A:延长超声时间以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同时消化 DNA 和 RNA。如果来源是大肠杆菌裂解液,含有大量的DNA,可以用链霉素沉淀等方法,预先去除大量的 DNA。
通过层析方法去除 :由于核酸带负电,在阴离子柱上会结合或阳离子柱上流穿,也可以有效去除核酸。
去除填料上结合的核酸 :一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 对核酸的去除效果较好。如果核酸的吸附过强,会采用强烈的方法,3M NaCl可去除靠静电吸附的核酸,然后用 1M NaOH分解核酸,之后再用 3M NaCl 清洗。

Q:柱子有色素如何去除?
A:
色素性质较复杂,可以根据填料的耐受情况,尝试使用高盐、NaOH、有机溶剂(如 30% 异丙醇或乙醇)或酸(如 0.01 M HCl)处理,*好将填料拆出,分别浸泡在不同试剂中。
也可以考虑使用混合试剂进行处理,例如:通过混合8M尿素 + 0.5 M 乙酸 + 2 M NaCl,对于和阴离子交换等介质紧密结合的化合物,通:苡行В换蛘1 M NaOH混合1-2 M 盐;可以耐受有机溶剂的情况下,尝试1 M NaOH混合20-30%的异丙醇;根据色素的不同性质,也可以尝试不同的去污剂,注意避免操作中产生气泡。
如果去除不掉,可以定期把色素污染部分的填料去除,或验证是否对于样品纯化造成影响。

Q:柱子堵了、超压如何处理?
A:可能原因 :缓冲液或样品未进行过滤、蛋白沉淀或杂质残留、清洗不及时等引起层析柱滤膜堵塞 ;流速过快、流动相粘度 ( 如乙醇等 ) 过高、温度过低。
建议处理方法 :首先将柱子卸下来,确定是系统还是柱子堵了。如果是柱子堵了 :参考说明书 CIP 操作进行清洁 ;更换层析柱顶端滤膜或超声清洗 (Hitrap,HiPrep 与 Precision Columns 3.2/300 柱型均不能拆卸换膜 ) ;必要时移除层析柱顶端 2-3mm 凝胶,调节 Adaptor消除顶端死体积。部分预装柱,也可以将填料倒出,去除板结或碎填料后,重新装填。测定柱效或重复之前做过的样品。后续注意样品前处理(包括上柱子前的离心或过滤处理、优化利于样品稳定存在的缓冲液条件、核酸等粘稠杂质的去除等)以及层析柱的日常维护。

以上就是天博最新下载地址为大家整理总结关于蛋白纯化常见问题(一)。
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